組織駐留巨噬細(xì)胞是一類異質(zhì)性的免疫細(xì)胞群體，參與組織穩(wěn)態(tài)、重塑和免疫監(jiān)視。在睪丸中，組織駐留巨噬細(xì)胞占體細(xì)胞群體的很大比例，是主要的白細(xì)胞類型（占比超過CD45至少50%以上）。睪丸組織駐留巨噬細(xì)胞被認(rèn)為在發(fā)育期和成年期具有多種功能。在胚胎期，它們調(diào)控血管生成和形態(tài)發(fā)生。早期對(duì)出生后小鼠的研究，主要分析培養(yǎng)中分離的細(xì)胞類型，暗示了睪丸巨噬細(xì)胞對(duì)類固醇生成的重要性。在體內(nèi)穩(wěn)態(tài)條件下，有報(bào)道顯示組織駐留巨噬細(xì)胞提供了適宜的組織微環(huán)境，支持萊迪希細(xì)胞功能，并協(xié)助精原細(xì)胞分化。睪丸巨噬細(xì)胞還被認(rèn)為與維持睪丸的免疫抑制環(huán)境有關(guān)。

在睪丸中已經(jīng)鑒定出兩種組織駐留巨噬細(xì)胞群體。小管周巨噬細(xì)胞位于精曲小管表面，緊鄰小管周肌樣細(xì)胞，而間質(zhì)巨噬細(xì)胞則分布在睪丸間質(zhì)中，與Leydig細(xì)胞密切接觸。目前，普遍認(rèn)為小管周巨噬細(xì)胞來源于循環(huán)的骨髓來源單核細(xì)胞，而間質(zhì)巨噬細(xì)胞則起源于胎兒卵黃囊來源的細(xì)胞，但出生后會(huì)被骨髓來源的巨噬細(xì)胞所替代。然而，目前尚未有關(guān)于睪丸巨噬細(xì)胞發(fā)展全景的高分辨率單細(xì)胞綜合分析的報(bào)道。

在本研究中，我們結(jié)合細(xì)胞命運(yùn)追蹤、荷蘭Liposoma氯膦酸鹽脂質(zhì)體聯(lián)合抗體清除睪丸巨噬細(xì)胞，以及巨噬細(xì)胞缺陷小鼠實(shí)驗(yàn)，采用深入的高維單細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)分析，研究睪丸組織駐留巨噬細(xì)胞的發(fā)育起源及更新。我們證明，在正常生理?xiàng)l件下，成年睪丸的組織駐留巨噬細(xì)胞來源于胚胎前體細(xì)胞，而出生后這些巨噬細(xì)胞對(duì)精子發(fā)生并非必需。這一發(fā)現(xiàn)深刻改變了我們對(duì)睪丸巨噬細(xì)胞異質(zhì)性、起源及功能的理解，并揭示了其與其他部位組織駐留巨噬細(xì)胞相比的獨(dú)特適應(yīng)性。

睪丸巨噬細(xì)胞Clodronate Liposomes氯膦酸鹽脂質(zhì)體清除文獻(xiàn)參考解決方案：

種屬：小鼠

年齡：十天

試劑：CSF1中和抗體（Bioxcell，美國）和clodronateliposomes氯膦酸鹽脂質(zhì)體（Liposoma，荷蘭），以消耗組織巨噬細(xì)胞和血液單核細(xì)胞。

方法：腹腔注射CSF1抗體（Bio X Cell，克隆5A1）或IgG1同型對(duì)照（Bio X Cell，克隆HRPN）（第一周期500 µg，第二和第三周期250 µg），隨后在次日靜脈注射ClodronateLiposomes氯膦酸鹽脂質(zhì)體或ControlLiposomes空白對(duì)照脂質(zhì)體（Liposoma；體積50 µl）。每三天進(jìn)行三個(gè)連續(xù)的注射周期。

取樣：在最后一次ClodronateLiposomes氯膦酸鹽脂質(zhì)體注射40小時(shí)、11天或21天后采集組織進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)和成像分析

αCSF1：CSF1中和抗體；Clod：ClodronateLiposomes

檢測：

恢復(fù)：

骨髓來源的單核細(xì)胞至少在3周時(shí)間內(nèi)，無法占據(jù)即使被清除劑定居巨噬細(xì)胞所空出的睪丸生態(tài)位。

如何清除睪丸巨噬細(xì)胞？詳細(xì)信息可以參考如下文獻(xiàn)。

論文信息：

論文題目：Generation, localization and functions of macrophages during the development of testis

期刊名稱：Nature Communications

時(shí)間期卷：11, Article number: 4375 (2020)

在線時(shí)間：2020年9月1日

DOI： doi.org/10.1038/s41467-020-18206-0

產(chǎn)品信息：

貨號(hào)：CP-005-005

規(guī)格：5ml+5ml

品牌：Liposoma

產(chǎn)地：荷蘭

名稱：Clodronate Liposomes&Control Liposomes

辦事處：Target Technology(靶點(diǎn)科技)

Clodronate Liposomes氯膦酸鹽脂質(zhì)體聯(lián)合抗體清除骨髓，骨髓來源的血液單核，還有重點(diǎn)研究的部位睪丸巨噬細(xì)胞，荷蘭Liposoma巨噬細(xì)胞清除劑Clodronate Liposomes見刊于Nature Communications：睪丸發(fā)育過程中巨噬細(xì)胞的產(chǎn)生、定位及功能。

Liposoma巨噬細(xì)胞清除劑Clodronate Liposomes氯膦酸二鈉脂質(zhì)體清除睪丸巨噬細(xì)胞的材料和方法：

Macrophage depletion

Ten-day-old wild-type mice were treated with CSF1 neutralizing antibody and clodronate-containing liposomes to deplete tissue macrophages and blood monocytes. Intraperitoneal injection of CSF1 antibody (Bio X Cell, clone 5A1) or IgG1 isotype control (Bio X Cell, clone HRPN) (500?µg on the first cycle, 250?µg on the second and third cycles) was followed by intravenous administration of clodronate-containing or empty control liposomes (Liposoma; in 50?µl volume) on a subsequent day. Three consecutive treatment cycles were performed at three-day intervals. Tissues were harvested for flow cytometry and imaging analyses 40?h, 11 days, or 21 days after the last clodronate injection

材料和方法文獻(xiàn)截圖：